蛋白表达是指利用模式生物(如细菌、酵母、动物细胞或植物细胞)表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。该技术在基因工程研究中占据核心地位,是蛋白质功能研究、药物靶点发现及生物制剂开发的基础手段。
原核表达系统是将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌,用于表达大量蛋白质的方法。该方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面具有广泛应用,是蛋白表达领域一种成熟、经济的表达体系。
K8官网科研人员建立了成熟的大肠杆菌表达及纯化服务平台,给予包括各种重组蛋白及其复合物在大肠杆菌中的表达与纯化服务。
服务项目:
重组质粒构建
重组表达测试
可溶性表达条件测试
小规模蛋白表达和纯化(2L培养基培养产物)
大规模蛋白表达和纯化(10L以上)
优点:
最常用、最经济实惠的蛋白表达系统
遗传背景清楚,技术成熟可靠
表达量高,成本低廉
表达产物分离纯化相对简单
缺点:
蛋白质翻译后缺乏加工机制
二硫键形成、糖基化和正确折叠受限
取得具有生物活性蛋白的概率较小
酵母表达系统是一种兼具原核和真核表达系统优点的高效蛋白表达平台,在基因工程领域得到日益广泛的应用。该系统可高水平表达蛋白,且具有翻译后修饰功能,被认可为一种表达大规模蛋白的强有力工具。
K8官网科研人员建立了成熟的酵母表达纯化服务平台,给予优质的重组蛋白在毕赤酵母中的表达与纯化服务。
服务项目:
重组酵母表达质粒构建
重组质粒电转化
重组表达子筛选
小规模蛋白表达和纯化(2L培养基培养产物)
大规模蛋白表达和纯化(10L以上)
优点:
以甲醇毕赤酵母为代表,表达量高
可诱导表达,操作灵活
糖基化机制接近高等真核生物
分泌蛋白易纯化
易实现高密度发酵
缺点:
部分蛋白产物易降解
表达量可控性有限
哺乳动物细胞表达系统可利用质粒转染和病毒载体感染两种方式表达外源重组蛋白。质粒转染取得稳定转染细胞需数周至数月,而病毒表达系统可在数天内完成外源基因整合,特别适用于从大量表达产物中快速检测目的蛋白。
该系统的核心价值在于:蛋白翻译后加工机制最接近体内的天然形式,能够最大程度地保留目标蛋白的生物学活性,是功能研究和药物开发的理想选择。
优点:
翻译后加工最接近天然形式
最容易保留生物活性
适用于功能性蛋白研究
缺点:
表达量通常较低
稳定细胞系建立技术难度大
生产成本相对较高