哺乳动物细胞蛋白表达服务公司

2015-11-30

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哺乳动物细胞蛋白表达系统

哺乳动物细胞蛋白表达系统具备完善的蛋白折叠与翻译后修饰（PTMs）能力，能够促进蛋白质正确折叠，并完成复杂的N型糖基化、O型糖基化、磷酸化等多种翻译后修饰，从而使表达产物在分子结构、理化特性及生物学功能等方面更接近天然蛋白。因此，哺乳动物细胞表达系统已成为治疗性重组蛋白，尤其是单克隆抗体药物研发与生产中应用最广泛的表达平台

K8官网生物医药基于无血清培养体系，搭建了成熟的哺乳动物蛋白表达与纯化服务平台，给予哺乳动物细胞表达载体构建与制备、CHO和HEK293细胞瞬时表达筛选、CHO-S和CHO-DG44稳定细胞系构建、CHO悬浮细胞生物反应器培养（3-30L），以及杂交瘤细胞滚瓶培养或生物反应器培养等服务。

服务项目：

贴壁细胞及悬浮细胞培养

瞬时转染表达筛选

稳定细胞系构建

Rabbit IgG expressed in transient transfected 293 cells

哺乳动物细胞表达系统

Note: the condition medium was run in 10%SDS-PAGE gel and stained with coomassie blue（备注:）

哺乳动物细胞蛋白表达系统的分类

根据目的蛋白表达的时空差异，可将表达系统分为以下三类：

表达系统	特点	优势	局限性
瞬时表达系统	宿主细胞导入载体后不经选择培养，载体DNA随细胞分裂逐渐丢失，目的蛋白的表达时限短暂	操作简洁、实验周期短；已有报道能放大到100L反应器中生产重组蛋白，产量（分泌型蛋白）可达1~10mg/L	对质粒纯度、转染效率等技术条件要求较高
稳定表达系统	载体进入宿主细胞并经选择培养，载体DNA稳定存在于细胞内，目的蛋白持久稳定表达	表达持久稳定，适合长期、大批量生产	需抗性筛选及加压扩增，耗时耗力
诱导表达系统	目的基因转录受外源小分子诱导后才开放	可精准调控表达时机，降低本底表达毒性	传统诱导剂（糖皮质激素、重金属离子等）存在特异性低、毒性高等问题

如何选择适合的表达系统？

重组蛋白的表达水平受多重因素影响，包括：转录与翻译调控元件、RNA剪接效率、mRNA稳定性、基因在染色体上的整合位点、重组蛋白对宿主细胞的毒性以及宿主细胞的遗传背景等。

核心建议：选定表达系统后，还需考虑表达载体与宿主细胞的合理搭配。为取得目标基因的高水平表达，建议同时尝试多种载体与宿主细胞组合，顺利获得并行筛选找到最优方案。

应用领域与实验流程

哺乳动物细胞表达系统已成为多种基因工程药物的核心生产平台，并在新基因发现、蛋白质结构与功能研究中发挥着不可替代的作用。

稳定表达细胞系的筛选流程

构建目的基因的表达载体

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确定合适的受体细胞系

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确定筛选方法（抗生素使用浓度优化）

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转染后48小时，梯度稀释铺板（1:100），加入筛选药物

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每3~4天换液一次，约2周后存活细胞长出岛状细胞克隆

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挑取单克隆耐药细胞，检测目的基因的存在与表达水平

哺乳动物细胞表达系统的关键要素

宿主细胞选择 —— CHO、HEK293、BHK、Vero 等

表达载体构建 —— 启动子、增强子、筛选标记等元件优化

基因共扩增与筛选 —— DHFR/GS 等扩增系统

可调控表达系统 —— Tet-On/Tet-Off 等诱导调控体系

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