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单次给药毒性试验即急性毒性试验，是指顺利获得单次或短时间内多次（一天内分2-3次）方式对动物给药，并在给药后的14天内陆续在观察动物反应，以分析其毒性反应及其严重程度。该试验对阐明药物的毒性作用、确定毒性靶器官、为长期毒性试验剂量设计以及I期临床试验起始剂量设计给予依据，具有重要意义。
1、啮齿类动物单次给药毒性试验
2、非啮齿类动物单次给药毒性试验
| 试验类型 | 动物种属 | 药物类型 | 给药途径 | 研究内容 |
| 急性毒性 | 小鼠 大鼠 豚鼠 家兔 比格犬 | 小分子 生物 天然产品 疫苗 中药 | 经口：灌胃、胶囊 非肠道：腹腔注射、静脉注射、肌肉注射、皮内注射、皮下注射、陆续在输液、玻璃体内注射 其他：鼻饲、鼻腔、眼睛、直肠、阴道、植入 | LD50 最大耐受剂量 最大无毒性反应剂量 最小致死剂量 最大给药量 |
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